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預雜交
1)每個(ge)管中置(zhi)換成大約300ulHYB-溶液,60℃水浴5分鐘(zhong),避免(mian)振蕩。
2)用等體積的HYB+取代HYB-。
3)60℃水浴,預雜(za)交4小時以上(shang)。
雜交
1)吸去預雜交的HYB+,加上100ul已(yi)加入探針的HYB+溶液(探針濃(nong)度約(yue)為1ng/ul)..
2)60℃ 溫浴(yu)過(guo)夜。
注:雜交與預雜交的溫度可以是55到60度不等,溫度越低,植物組織原位雜交,探針結合越好,溫度越高,背景越小。
原位雜交:
原位(wei)雜(za)(za)交(jiao)是(shi)(shi)指用(yong)特(te)定探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)定位(wei)、檢測DNA、RNA的一種(zhong)有(you)效(xiao)的實驗(yan)方(fang)法(fa),通(tong)過把特(te)點序列(lie)客隆到特(te)殊載(zai)體上,通(tong)過轉錄酶反轉一條(tiao)天然的RNA探(tan)(tan)針(zhen)(zhen),將探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)和(he)切片樣品進(jin)行雜(za)(za)交(jiao),通(tong)過一系(xi)列(lie)顯色(se)方(fang)法(fa),來確定RNA或(huo)者DNA表達區域;本中心原位(wei)雜(za)(za)交(jiao)探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)采(cai)用(yong)的是(shi)(shi)第高(gao)辛(xin)和(he)生(sheng)物素標記(ji)(ji),靈(ling)敏度和(he)同位(wei)素相當。 我(wo)們采(cai)用(yong)roche標記(ji)(ji)及顯色(se)試(shi)劑盒,GISH/ISH/FISH按照探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)進(jin)行收費(fei)(fei)(fei),每(mei)(mei)個試(shi)劑盒每(mei)(mei)條(tiao)探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)可(ke)以(yi)雜(za)(za)交(jiao)60-80張玻片,收費(fei)(fei)(fei)為(wei)1萬5千元,GISH雜(za)(za)交(jiao)因需(xu)要加抗淬滅劑每(mei)(mei)條(tiao)探(tan)(tan)針(zhen)(zhen)收費(fei)(fei)(fei)為(wei)1萬9千元。量大優惠!
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