熒光(guang)原(yuan)位(wei)雜(za)(za)交技（fish）原(yuan)理：是(shi)利用熒光(guang)標記的(de)特(te)異核酸探針(zhen)與細胞(bao)內(nei)相應的(de)靶DNA分(fen)(fen)(fen)子(zi)或(huo)(huo)RNA分(fen)(fen)(fen)子(zi)雜(za)(za)交，通過在熒光(guang)顯微鏡或(huo)(huo)共聚(ju)焦激光(guang)掃描儀下觀察熒光(guang)信號，來確定(ding)與特(te)異探針(zhen)雜(za)(za)交后被染(ran)色(se)的(de)細胞(bao)或(huo)(huo)細胞(bao)器的(de)形態和(he)分(fen)(fen)(fen)布，或(huo)(huo)者是(shi)結合了熒光(guang)探針(zhen)的(de)DNA區域或(huo)(huo)RNA分(fen)(fen)(fen)子(zi)在染(ran)色(se)體或(huo)(huo)其他(ta)細胞(bao)器中(zhong)的(de)定(ding)位(wei)。

熒光原位(wei)雜(za)交(jiao)技（fish）實驗(yan)步驟(zou)：

1、組織固(gu)(gu)定：組織取出洗凈(jing)后(hou)立(li)即放入(ru)固(gu)(gu)定液（DEPC水(shui)配制）中固(gu)(gu)定2-12h。

2、脫(tuo)水(shui)(shui)：組織固定完成后(hou)經梯(ti)度酒精脫(tuo)水(shui)(shui)后(hou)浸(jin)蠟，包埋。

3、切(qie)(qie)片(pian)(pian)：石蠟(la)經(jing)切(qie)(qie)片(pian)(pian)機(ji)切(qie)(qie)片(pian)(pian)，攤片(pian)(pian)機(ji)撈(lao)片(pian)(pian)，62°烤箱烤片(pian)(pian)2h。

4、石蠟(la)切片(pian)(pian)脫蠟(la)至水：依次將切片(pian)(pian)放(fang)入(ru)二甲1苯Ⅰ 15min-二甲1苯Ⅱ 15min-無水乙醇Ⅰ 5min-無水乙醇Ⅱ 5min，風干，DEPC水浸(jin)泡。

5、消(xiao)化：根(gen)據組(zu)織固定時間長短，切片于修復液中(zhong)煮沸10分鐘，自然冷(leng)卻(que)。后基因筆(bi)畫(hua)圈，根(gen)據不同組(zu)織不同指(zhi)標特性，滴加蛋白酶K(20ug/ml) 37°消(xiao)化20min。純水沖洗后PBS洗3次×5min。

意義

在研究DNA分子原理的基礎上發展起來的一種技術。其基本原理是兩條核苷酸單鏈片段，在適宜的條件下，能過氫鍵結合，形成DNA-DNA、DNA-RNA或 RNA-RNA 雙鍵分子的特點，應用帶有標記的（有性同位素，如3H、35S、32P、熒光素生物素、等非性物質）DNA或RNA片段作為核酸探針，與組織切片或細胞內待測核酸（RNA或DNA）片段進行雜交，然后可用自顯影等方法予以顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的 mRNA或DNA 的存在并定位；用原位雜交技術，可在原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。此方法有很高的敏感性和特異性，可進一步從分子水平來探討細胞的功能表達及其調節機制。已成為當今細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

原(yuan)位雜交的應用范圍(wei)：

①細胞特異性mRNA轉錄的(de)定位，可用于基因(yin)圖譜，基因(yin)表達(da)和基因(yin)組(zu)進化(hua)的(de)研究；

②感1染組織(zhi)中病(bing)毒DNA/RNA的檢(jian)測和(he)定位，如(ru)EB病(bing)毒mRNA、人類(lei)乳1頭(tou)狀瘤1病(bing)毒和(he)巨細胞(bao)病(bing)毒DNA的檢(jian)測；

③癌基(ji)因、抑(yi)癌基(ji)因及各種功(gong)能基(ji)因在(zai)轉(zhuan)錄水(shui)平的表達及其變化的檢測；

④基因在染色體上的定位(wei)；

⑤檢測染色體的變化，分子病理技術服務，如染色體數量異常和(he)染色體易位等(deng)；

⑥分(fen)裂(lie)間期細胞遺傳(chuan)(chuan)學的(de)研究，如遺傳(chuan)(chuan)病的(de)產前診(zhen)(zhen)斷(duan)和某(mou)些遺傳(chuan)(chuan)病基因(yin)攜帶(dai)者的(de)確(que)定，某(mou)些腫1瘤的(de)診(zhen)(zhen)斷(duan)和生物(wu)學劑量測(ce)定等。