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亞細胞定位原理
利用GFP、RFP等熒光蛋白具有的熒光性質和靈敏性,來示蹤細胞內的蛋白。將目標蛋白與熒光蛋白的N端或者C端融合,通過瞬轉或穩轉,使該融合蛋白在受體材料細胞內表達,目標蛋白會牽引熒光蛋白一起定位到目標細胞器,湖北亞細胞定位,經過激光共聚焦顯微鏡激光照射,熒光蛋白會發出熒光,通過觀察熒光蛋白在細胞內顯示的位置,從而可以確定目標蛋白的亞細胞定位情況,即可對蛋白質進行準確定位。
為什么有(you)的基因定位結果與預想的不(bu)一致?
對于一(yi)個特定的定位(wei)載體,只(zhi)要熒光(guang)表達(da)較好,其定位(wei)結(jie)果是(shi)確定的,不會隨人為意愿或操作而改變。至于有(you)時候(hou)和(he)預(yu)想的結(jie)果不一(yi)樣,可能和(he)蛋(dan)白本(ben)身、選擇(ze)的表達(da)載體以及熒光(guang)蛋(dan)白融合方式(shi)等有(you)關(guan)。
為(wei)什么有(you)的普(pu)通定位結果出(chu)來后無(wu)法(fa)準確判斷(duan)其(qi)定位位置?
細胞中的細胞器復雜且多樣,除一些常見的、特征比較明顯的細胞器外,有些細胞器在激光共聚焦下形狀比較相似,例如:線粒體、過氧化物酶體、高爾基體等細胞器,它們的熒光表達形狀可能都是點狀,因此不易區分。這時可以結合基因的其他功能研究來判斷其可能表達的位置。另外,亞細胞定位公司,蛋白表達本身也是一個復雜的過程,亞細胞定位找哪里,涉及到多個合成場所及轉運過程,自身表達情況可能比較復雜,因此不易判斷具體的表達位置。
黃(huang)金納(na)米棒在癌(ai)(ai)細(xi)胞(bao)中的亞細(xi)胞(bao)定(ding)(ding)位(wei):Sana Mesiya 等人研究了黃(huang)金納(na)米棒在癌(ai)(ai)細(xi)胞(bao)中的亞細(xi)胞(bao)定(ding)(ding)位(wei)。結果表明(ming),洋蔥亞細(xi)胞(bao)定(ding)(ding)位(wei),黃(huang)金納(na)米棒定(ding)(ding)位(wei)于(yu)(yu)癌(ai)(ai)細(xi)胞(bao)的線粒體(ti)和溶酶體(ti)中,這一發現可(ke)能有(you)助于(yu)(yu)開發基于(yu)(yu)納(na)米技術的激光免疫療法。
檳榔 Catalase 基因的亞細胞定位:梁婷等人通過同源和 RACE 技術獲得檳榔全長 cDNA,并對其進行生物信息學分析及亞細胞定位。結果表明,檳榔 Catalase 基因編碼的蛋白質可能定位于特定的細胞器中。
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