植(zhi)物染(ran)(ran)色(se)體(ti)原位(wei)雜交技術的應用非常廣(guang)泛。例如(ru)，它可以(yi)用來研究植(zhi)物基因(yin)組的結構和功(gong)能，包(bao)括(kuo)基因(yin)定位(wei)、染(ran)(ran)色(se)體(ti)重組、基因(yin)表達和基因(yin)組演(yan)化等方面。此外，該技術還(huan)可以(yi)用來檢測植(zhi)物中的染(ran)(ran)色(se)體(ti)異常，如(ru)染(ran)(ran)色(se)體(ti)缺失、重復和易(yi)位(wei)等。

植物染(ran)(ran)色(se)體(ti)(ti)原位雜交技術的(de)優(you)點在(zai)于它可(ke)以(yi)直接觀察到染(ran)(ran)色(se)體(ti)(ti)上的(de)目標DNA序列(lie)，而(er)不需要進行(xing)PCR擴增(zeng)或(huo)測(ce)(ce)序等操作。此外，該技術還可(ke)以(yi)同時(shi)檢測(ce)(ce)多個目標DNA序列(lie)，從而(er)提高檢測(ce)(ce)效率和準確(que)性。

一. 原位雜交天

1. 重新水化和固定(ding)

1） 吸取固(gu)定好的胚胎，原位雜(za)交技術，加入50%的PBST溶液，放置5分(fen)鐘(zhong)。

2） 置(zhi)換成30％的PBST溶(rong)液，放置(zhi)5分鐘

3） 置換成PBST溶液，放置5分鐘(zhong)，重復一(yi)次(ci)

4） 置換(huan)成(cheng)4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘

5） 用PBST洗(xi)兩次(ci)，每(mei)次(ci)放置(zhi)五分鐘(zhong)，室溫。

蛋(dan)白(bai)酶處理與后固定（本實(shi)驗不(bu)做此步）

1） 用10ul/ml的(de)(de)蛋(dan)白酶K在室溫(wen)下(xia)處(chu)(chu)理(li)胚(pei)胎。5體節(jie)以(yi)下(xia)的(de)(de)胚(pei)胎不(bu)處(chu)(chu)理(li)，5體節(jie)到24小(xiao)時(shi)(shi)的(de)(de)胚(pei)胎處(chu)(chu)理(li)3分鐘，原位雜交(jiao)，24小(xiao)時(shi)(shi)以(yi)上的(de)(de)胚(pei)胎處(chu)(chu)理(li)5分鐘或者更長(chang)。發育時(shi)(shi)間越短的(de)(de)胚(pei)胎越嫩，可(ke)以(yi)不(bu)用或者少(shao)用蛋(dan)白酶處(chu)(chu)理(li)，發育時(shi)(shi)間長(chang)的(de)(de)胚(pei)胎就需(xu)要用蛋(dan)白酶來疏松組織，以(yi)便于雜交(jiao)。

2） 用PBST溶液輕洗(xi)，原位(wei)雜交公司，在PBST中(zhong)放置(zhi)5分鐘(zhong)。

3） 用(yong)4％多聚甲醛的PBS溶液固定20分鐘，室溫。

4） 用PBST洗兩次，每(mei)次放(fang)置五分鐘，室溫。

熒光原(yuan)位(wei)雜交(jiao)（FISH）技(ji)術具有以下優(you)點：

高(gao)特(te)異(yi)性(xing)：熒光探針(zhen)的(de)合(he)成是定向的(de)，保證了雜(za)交(jiao)過(guo)程的(de)特(te)異(yi)性(xing)，可以有效(xiao)地降低非(fei)特(te)異(yi)性(xing)雜(za)交(jiao)和背(bei)景干(gan)擾。

高靈敏度(du)：熒光信(xin)號的檢(jian)測(ce)比性信(xin)號的檢(jian)測(ce)更靈敏，GISH，可以檢(jian)測(ce)出低拷(kao)貝數的DNA序(xu)(xu)列，甚至可以檢(jian)測(ce)單個基因序(xu)(xu)列。

快速簡便：FISH技術操作簡便，雜交過程可以在數小時或數天內完成，而且不需要過于復雜的設備，便于在實驗室開展。