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貝科新肽科技公司-熒光原位雜交

||| 產品編號:596764018                    更新時間:2025-05-05
武漢貝科新肽科技有限公司
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而是對完整的斑馬魚胚胎進行探針雜交及檢測,從整體上把握探針的結合部位,然后對胚胎進行切片,以確定探針結合的具體位置。整胚原位雜交在斑馬魚分子生物學研究中是一種非常重要的實驗方法,原位雜交的探針可以是同位素的探針,用自顯影來檢測;也可以是非同位素的探針,通過熒光或酶法予以檢測。我們這兒所介紹的一種原位雜交的方法是通過后者,以標記探針,然后用酶聯的方法進行檢測。

①細胞特異性mRNA轉錄的定位,可用于基因圖譜,基因表達和基因組進化的研究;②組織中病毒DNA/RNA的檢測和定位,如EB病毒mRNA、人類狀瘤病毒和巨細胞病毒DNA的檢測;③癌基因、抑癌基因及各種功能基因在轉錄水平的表達及其變化的檢測;④基因在染色體上的定位;⑤檢測染色體的變化,如染色體數量異常和染色體易位等;⑥分裂間期細胞遺傳學的研究,如遺傳病的產前診斷和某些遺傳病基因攜帶者的確定,熒光原位雜交,某些的診斷和生物學劑量測定等。

一. 原位雜交天

1. 重(zhong)新水化(hua)和固(gu)定

1) 吸取固(gu)定好的胚(pei)胎,加入50%的PBST溶液,放置(zhi)5分鐘。

2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘(zhong)

3) 置(zhi)換成PBST溶液,放置(zhi)5分鐘,重復一(yi)次

4) 置(zhi)換(huan)成4%多(duo)聚(ju)甲醛的(de)PBS溶液固(gu)定20分鐘

5) 用PBST洗兩次(ci),每(mei)次(ci)放置五分鐘,室溫(wen)。

蛋白(bai)酶(mei)處(chu)理與后(hou)固定(本實驗不(bu)做(zuo)此步(bu))

1) 用(yong)10ul/ml的蛋(dan)白酶(mei)(mei)K在室溫(wen)下處理(li)胚胎(tai)(tai)。5體(ti)節以(yi)下的胚胎(tai)(tai)不處理(li),5體(ti)節到24小時(shi)的胚胎(tai)(tai)處理(li)3分鐘,24小時(shi)以(yi)上的胚胎(tai)(tai)處理(li)5分鐘或者(zhe)更長。發育時(shi)間(jian)越(yue)短的胚胎(tai)(tai)越(yue)嫩,可以(yi)不用(yong)或者(zhe)少(shao)用(yong)蛋(dan)白酶(mei)(mei)處理(li),發育時(shi)間(jian)長的胚胎(tai)(tai)就需要用(yong)蛋(dan)白酶(mei)(mei)來疏松組(zu)織,以(yi)便于雜(za)交。

2) 用PBST溶液輕洗(xi),在PBST中(zhong)放置5分鐘。

3) 用4%多聚甲醛(quan)的(de)PBS溶液固定(ding)20分鐘(zhong),室溫。

4) 用PBST洗兩(liang)次(ci),每(mei)次(ci)放置五(wu)分鐘,室溫。

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