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先生: |
一. 原位雜交天
1. 重(zhong)新水化(hua)和固(gu)定
1) 吸取固(gu)定好的胚(pei)胎,加入50%的PBST溶液,放置(zhi)5分鐘。
2) 置換成30%的PBST溶液,放置5分鐘(zhong)
3) 置(zhi)換成PBST溶液,放置(zhi)5分鐘,重復一(yi)次
4) 置(zhi)換(huan)成4%多(duo)聚(ju)甲醛的(de)PBS溶液固(gu)定20分鐘
5) 用PBST洗兩次(ci),每(mei)次(ci)放置五分鐘,室溫(wen)。
蛋白(bai)酶(mei)處(chu)理與后(hou)固定(本實驗不(bu)做(zuo)此步(bu))
1) 用(yong)10ul/ml的蛋(dan)白酶(mei)(mei)K在室溫(wen)下處理(li)胚胎(tai)(tai)。5體(ti)節以(yi)下的胚胎(tai)(tai)不處理(li),5體(ti)節到24小時(shi)的胚胎(tai)(tai)處理(li)3分鐘,24小時(shi)以(yi)上的胚胎(tai)(tai)處理(li)5分鐘或者(zhe)更長。發育時(shi)間(jian)越(yue)短的胚胎(tai)(tai)越(yue)嫩,可以(yi)不用(yong)或者(zhe)少(shao)用(yong)蛋(dan)白酶(mei)(mei)處理(li),發育時(shi)間(jian)長的胚胎(tai)(tai)就需要用(yong)蛋(dan)白酶(mei)(mei)來疏松組(zu)織,以(yi)便于雜(za)交。
2) 用PBST溶液輕洗(xi),在PBST中(zhong)放置5分鐘。
3) 用4%多聚甲醛(quan)的(de)PBS溶液固定(ding)20分鐘(zhong),室溫。
4) 用PBST洗兩(liang)次(ci),每(mei)次(ci)放置五(wu)分鐘,室溫。
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