菌(jun)落的裂解及DNA結合于纖維素(su)濾膜

（1） 在一張保鮮膜(mo)上制作一個裝有0.5mol/L NaOH的(de)小(xiao)洼（0.75ml），使菌落面(mian)朝上，將濾膜(mo)放到(dao)小(xiao)洼上，展平保鮮膜(mo)，使濾膜(mo)均勻(yun)濕潤，ISH，讓濾膜(mo)留(liu)于原處2-3分鐘(zhong)。

（2） 用干(gan)紙巾從濾膜(mo)的下(xia)方吸干(gan)濾膜(mo)，植物染色體原位雜交(jiao)，用一(yi)張(zhang)新的保鮮膜(mo)和新配制的0.5mol/L NaOH重復步驟（1）。

（3） 吸干濾膜，原位(wei)雜交(jiao)，將濾膜轉移到(dao)新的帶有(you)1mol/L Tris·Cl(pH7.4）的保鮮膜洼上(shang)。5分鐘后吸干濾膜，再重復一次該步驟。

（4） 吸干(gan)濾(lv)膜，把(ba)它(ta)轉(zhuan)移到有1.5mol/L NaCl、0.5mol/L Tris·Cl (pH7.4）的保鮮膜小洼上(shang)5分(fen)鐘后吸干(gan)濾(lv)膜，轉(zhuan)移到一張(zhang)干(gan)的濾(lv)紙上(shang)，置于(yu)室(shi)溫(wen)20-30分(fen)鐘，使濾(lv)膜干(gan)燥(zao)。

（5） 將濾膜夾(jia)在兩張干的濾紙(zhi)之間，在真(zhen)空烤(kao)箱中于80℃干烤(kao)2小時，固定(ding)DNA。

（6） 將固定在膜上的DNA與32 P標記的RNA進行雜交。

原(yuan)位雜交技(ji)術(shu)(shu)（in situhybridization）是(shi)以標(biao)(biao)記(ji)的核(he)(he)(he)酸(suan)分子為探(tan)(tan)針(zhen)，在組織(zhi)細(xi)胞原(yuan)位檢測特(te)(te)異(yi)核(he)(he)(he)酸(suan)分子的技(ji)術(shu)(shu)。使(shi)含有特(te)(te)異(yi)序列、經過標(biao)(biao)記(ji)的核(he)(he)(he)酸(suan)單鏈即(ji)探(tan)(tan)針(zhen)，在適宜條(tiao)件下與(yu)組織(zhi)細(xi)胞中的互補(bu)核(he)(he)(he)酸(suan)單鏈即(ji)靶核(he)(he)(he)酸(suan)發生雜交，再以自顯(xian)影或細(xi)胞化學方(fang)法對標(biao)(biao)記(ji)探(tan)(tan)針(zhen)進行探(tan)(tan)測，從而在細(xi)胞原(yuan)位顯(xian)示特(te)(te)異(yi)的DNA或RNA分子。

可以檢測cRNA、miRNA、LnRNA、DNA。可以各種種屬的標本，包括哺乳動物、爬行動物、菌、植物標本。也可以檢測組織芯片。

熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridization，FISH）是在20世紀80年代末在性原位雜交技術的基礎上發展起來的一種非性分子細胞遺傳技術，以熒光標記取代同位素標記而形成的一種新的原位雜交方法，原位雜交公司，探針首先與某種介導分子（reporter molecule）結合，雜交后再通過細胞化學過程連接上熒光染料.FISH的基本原理是將DNA（或RNA）探針用特殊的核苷酸分子標記，然后將探針直接雜交到染色體或DNA纖維切片上，再用與熒光素分子偶聯的單與探針分子特異性結合來檢測DNA序列在染色體或DNA纖維切片上的定性、定位、相對定量分析.FISH具有安全、快速、靈敏度高、探針能長期保存、能同時顯示多種顏色等優點，不但能顯示中期分裂相，還能顯示于間期核.同時在熒光原位雜交基礎上又發展了多彩色熒光原位雜交技術和染色質纖維熒光原位雜交技術.

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