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原位雜交第二天
1.
1)將探針(zhen)(zhen)回收,放于-20C保存(通常探針(zhen)(zhen)可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液1毫升,60℃,原(yuan)位雜(za)交(jiao),放(fang)置30分鐘,重復一次。
3)置(zhi)換2XSSCT1ml,60℃,放置(zhi)15分鐘。
4)置(zhi)(zhi)換0.2XSSCT1ml,60℃,染色體熒光(guang)原位雜交,放置(zhi)(zhi)30分鐘,重復一次。
2.
1)用MABT洗兩次,原位(wei)雜交檢測,每次五分鐘,放在搖(yao)床輕輕搖(yao)動。
2)室(shi)溫下加1ml 1:2:7溶液,時(shi)間為一小(xiao)時(shi)。
3)按(an)1:3000的比例在1:2:7溶(rong)液中加入酶連,熒光原位雜交,4C 冰(bing)箱過夜。
熒光(guang)原位雜交(jiao)(Fluorescence In Situ Hybridization,FISH)是(shi)在性原位雜交(jiao)技(ji)術基(ji)礎上發展起來的(de)一(yi)種非性分子生(sheng)物學和(he)細(xi)胞遺傳學結合(he)的(de)新技(ji)術,是(shi)以熒光(guang)標記取代(dai)同位素(su)標記而形成的(de)一(yi)種新的(de)原位雜交(jiao)方(fang)法。
FISH技術具有許多優點,如非性(xing)、高特異(yi)性(xing)、高靈敏度、快速簡便(bian)、可多重染色(se)等(deng)。這些特點使得(de)FISH技術在細胞生物(wu)學和臨床醫學領域得(de)到了廣(guang)泛應用,例(li)如用于研究基因(yin)表達、基因(yin)組變異(yi)和染色(se)體異(yi)常等(deng)。
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