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在酵母(mu)雙雜交系統中,BD與(yu)(yu)X蛋(dan)白(bai)融合(he),AD與(yu)(yu)Y蛋(dan)白(bai)融合(he),如果(guo)X、Y之間形成蛋(dan)白(bai)-蛋(dan)白(bai)復合(he)物,AD與(yu)(yu)BD會在空間上(shang)充(chong)分接近,重新構(gou)(gou)成結(jie)構(gou)(gou)域,啟(qi)動(dong)報告基(ji)因的(de)(de)(de)(de)(de)轉錄。擁(yong)(yong)有(you)BD質(zhi)粒(li)的(de)(de)(de)(de)(de)酵母(mu)可以在某一(yi)(yi)缺(que)(que)陷(xian)培養(yang)(yang)基(ji)上(shang)生(sheng)(sheng)長,擁(yong)(yong)有(you)AD質(zhi)粒(li)的(de)(de)(de)(de)(de)酵母(mu)菌可以在另一(yi)(yi)種(zhong)缺(que)(que)陷(xian)培養(yang)(yang)基(ji)上(shang)生(sheng)(sheng)長,通過接合(he)(mating)或共轉化使酵母(mu)同時擁(yong)(yong)有(you)AD與(yu)(yu)BD質(zhi)粒(li)。如果(guo)BD上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)與(yu)(yu)AD上(shang)的(de)(de)(de)(de)(de)誘餌蛋(dan)白(bai)存在相互(hu)作用,這樣的(de)(de)(de)(de)(de)酵母(mu)可以在三缺(que)(que)及四缺(que)(que)的(de)(de)(de)(de)(de)培養(yang)(yang)基(ji)上(shang)生(sheng)(sheng)長,并啟(qi)動(dong)β-半乳糖苷(gan)酶基(ji)因的(de)(de)(de)(de)(de)轉錄。
分(fen)子(zi)(zi)病(bing)(bing)理學(xue)(xue)是與分(fen)子(zi)(zi)生(sheng)(sheng)物學(xue)(xue)、細胞遺傳學(xue)(xue)等(deng)(deng)學(xue)(xue)科(ke)相(xiang)互滲透(tou),在(zai)蛋白質和核酸等(deng)(deng)生(sheng)(sheng)物大(da)分(fen)子(zi)(zi)水平上研(yan)究疾(ji)病(bing)(bing)病(bing)(bing)因(yin)、發(fa)病(bing)(bing)機制(zhi)、形態變(bian)(bian)化及(ji)功能損害等(deng)(deng)方面發(fa)生(sheng)(sheng)和發(fa)展規律的(de)(de)(de)新的(de)(de)(de)分(fen)支學(xue)(xue)科(ke),對(dui)疾(ji)病(bing)(bing)的(de)(de)(de)病(bing)(bing)因(yin)、發(fa)展、發(fa)病(bing)(bing)機制(zhi)及(ji)形態變(bian)(bian)化,從傳統形態學(xue)(xue)概(gai)念深入至分(fen)子(zi)(zi)或基(ji)(ji)因(yin)水平,分(fen)子(zi)(zi)病(bing)(bing)理已(yi)成為腫1瘤病(bing)(bing)理研(yan)究中重(zhong)要的(de)(de)(de)內容(rong)和手段(duan)。①細胞特(te)異性mRNA轉(zhuan)錄(lu)的(de)(de)(de)定(ding)位(wei),可用于基(ji)(ji)因(yin)圖譜(pu),分(fen)子(zi)(zi)病(bing)(bing)理技術服(fu)務,基(ji)(ji)因(yin)表達和基(ji)(ji)因(yin)組進化的(de)(de)(de)研(yan)究;
適用場景
1、高靈敏(min)度(du)地檢測蛋(dan)白-蛋(dan)白的交互作用;
2、尋找在蛋(dan)白(bai)(bai)-蛋(dan)白(bai)(bai)交互作用中起關鍵(jian)作用的結構(gou)域或(huo)活性位(wei)點;
3、尋找與靶蛋白(bai)相互作用的(de)新蛋白(bai);
4、尋找具有藥1物治1療(liao)作用(yong)的小分子多(duo)肽;
5、尋找調控蛋白質(zhi)相互作用的化合物;
6、繪制蛋白質相互作用圖譜。
酵(jiao)母雙雜交技術的優點
1、無需純化蛋白;
2、檢測(ce)在活(huo)1細胞內(nei)進行,可以(yi)在一定程度上代表體內(nei)的(de)真實(shi)情況;
3、檢測的(de)結果(guo)是基(ji)因表達產物的(de)積累(lei)效應(ying),因而可檢測存在于蛋白質之(zhi)間(jian)的(de)微弱(ruo)的(de)或暫時的(de)相互作用;
4、酵母雙雜(za)交(jiao)系統可采用不同組(zu)織、器(qi)1官、細胞類(lei)型和分化時期材料構建(jian)cDNA文庫,并能分析細胞質(zhi)、細胞核等(deng)多種亞(ya)細胞部(bu)位的蛋白。
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