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先生: |
原位雜交第二天
1.
1)將探針回收,放于-20C保存(通常探針可重復使用十次左右)。
2)加入50%甲酰胺/2XSSCT溶液(ye)1毫升,60℃,染色體原(yuan)位(wei)雜交(jiao)技(ji)術服務,放(fang)置30分鐘,重(zhong)復一次。
3)置換(huan)2XSSCT1ml,60℃,放置15分鐘。
4)置換(huan)0.2XSSCT1ml,60℃,放置30分鐘(zhong),重(zhong)復一(yi)次。
2.
1)用MABT洗兩次,每次五分鐘,放在搖(yao)床輕輕搖(yao)動。
2)室溫下(xia)加1ml 1:2:7溶液,時(shi)間為(wei)一小時(shi)。
3)按1:3000的比例在1:2:7溶液中加入酶連,4C 冰箱過夜。
原位末端凋亡檢(jian)測(Tunel)
實驗原理: TUNEL技術可對組織或(huo)細胞中(zhong)凋(diao)亡(wang)小體或(huo)單個凋(diao)亡(wang)細胞進行染色,能(neng)準確反映細胞凋(diao)亡(wang)典型的生物(wu)化學和(he)形(xing)態特征(zheng)。凋(diao)亡(wang)細胞內(nei)內(nei)源性核(he)(he)酸內(nei)切酶(mei)(mei)被而(er)將(jiang)自身染色體DNA切斷成缺口或(huo)3-OH末端(duan)片段(duan)這一(yi)特點,利用脫(tuo)氧核(he)(he)苷(gan)酸末端(duan)轉移(yi)酶(mei)(mei)將(jiang)標(biao)(biao)有標(biao)(biao)記物(wu)(如,生物(wu)素(su)或(huo)熒光素(su))的脫(tuo)氧核(he)(he)苷(gan)酸轉移(yi)到3-OH末端(duan),再用組化法或(huo)熒光檢測凋(diao)亡(wang)細胞。
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