水稻(dao)(dao)種(zhong)子(zi)是人類(lei)重要的(de)食(shi)物來源，其發育(yu)(yu)涉及一個復雜的(de)調(diao)(diao)控網(wang)絡，其中轉錄因(yin)子(zi)發揮了關鍵作用。MADS轉錄因(yin)子(zi)家族成(cheng)員是植物花器1官發育(yu)(yu)的(de)重要調(diao)(diao)控因(yin)子(zi)，已有(you)的(de)研(yan)究表(biao)明(ming)，幾乎所有(you)的(de)水稻(dao)(dao)MADS基因(yin)都在種(zhong)子(zi)中表(biao)達，但對MADS家族成(cheng)員參與水稻(dao)(dao)種(zhong)子(zi)發育(yu)(yu)調(diao)(diao)控的(de)研(yan)究結果(guo)仍比較少。

在這項研究中(zhong)，研究組(zu)基于前期的表(biao)達(da)(da)譜(pu)(pu)研究基礎，分(fen)析(xi)得到了(le)一個在水稻(dao)生殖(zhi)發(fa)育階段優先表(biao)達(da)(da)的轉錄因子(zi)MADS29。細致分(fen)析(xi)表(biao)明，MADS29在花藥、胚珠(zhu)和種子(zi)中(zhong)均(jun)表(biao)達(da)(da)，且在受精后的母體(ti)組(zu)織(zhi)表(biao)達(da)(da)量(liang)高。MADS29的反義轉1基因植(zhi)株呈現種子(zi)皺縮、淀粉粒(li)形態異(yi)常、灌漿速率下降(jiang)等表(biao)型。通過解(jie)剖學切片、末端(duan)轉移酶標記實驗(yan)和全基因組(zu)表(biao)達(da)(da)譜(pu)(pu)芯(xin)片分(fen)析(xi)等，研究人員證明了(le)MADS29通過調控程序(xu)化(hua)死1亡(PCD)過程促(cu)進(jin)珠(zhu)心細胞和珠(zhu)心突起(qi)處的降(jiang)解(jie)。進(jin)一步的體(ti)外凝膠(jiao)阻滯實驗(yan)顯示，MADS29能(neng)夠通過直接結合程序(xu)化(hua)死1亡相關基因的啟動子(zi)區域而(er)調控其表(biao)達(da)(da)，進(jin)而(er)影響胚乳(ru)發(fa)育。

原位(wei)(wei)雜(za)交（in situ hybridization）將標記(ji)的(de)(de)核(he)酸(suan)探針與(yu)細胞或組織中的(de)(de)核(he)酸(suan)進(jin)行雜(za)交，稱為原位(wei)(wei)雜(za)交，使(shi)用DNA或者RNA探針來(lai)檢測(ce)與(yu)其互補的(de)(de)另一條鏈在細菌或其他真核(he)細胞中的(de)(de)位(wei)(wei)置。

       原位雜(za)交技術(shu)的(de)基本原理是利用核酸(suan)(suan)分子單鏈(lian)之間有互(hu)補的(de)堿基序(xu)列，將(jiang)有放1射性或非放1射性的(de)外源核酸(suan)(suan)(即探(tan)針(zhen))與(yu)組織、細(xi)胞或染色體(ti)上待測(ce)(ce)DNA或RNA互(hu)補配對，結合(he)成專一的(de)核酸(suan)(suan)雜(za)交分子，經(jing)一定(ding)的(de)檢(jian)測(ce)(ce)手段將(jiang)待測(ce)(ce)核酸(suan)(suan)在組織、細(xi)胞或染色體(ti)上的(de)位置顯示(shi)出來。為顯示(shi)特定(ding)的(de)核酸(suan)(suan)序(xu)列必須具(ju)備3個重(zhong)要條件(jian)：組織、細(xi)胞或染色體(ti)的(de)固(gu)定(ding)、具(ju)有能與(yu)特定(ding)片段互(hu)補的(de)核苷酸(suan)(suan)序(xu)列(即探(tan)針(zhen))、有與(yu)探(tan)針(zhen)結合(he)的(de)標記(ji)物

后固(gu)定(ding)：胃(wei)蛋白(bai)酶(mei)消化(hua)后才需要。固(gu)定(ding)液為(wei)1%多聚甲醛/0.1 M PBS（PH7.2-7.6），植物(wu)RNA原位(wei)雜(za)交檢測服(fu)務，含有(you)1/1000 DEPC。室溫固(gu)定(ding) 10分鐘。蒸餾水洗(xi)滌3次。

  原位雜(za)交(jiao)的(de)預雜(za)交(jiao)：濕(shi)盒(he)的(de)準備——干的(de)雜(za)交(jiao)盒(he)底(di)部(bu)加20%甘油(you)20ml以保持(chi)濕(shi)度。按每張切(qie)片20μι加預雜(za)交(jiao)液(ye)。恒溫(wen)箱38-42℃2—4小時。吸(xi)取多余液(ye)體(ti)，不洗。

   雜(za)交(jiao)——按每張切片20μι雜(za)交(jiao)液，加在切片上。將原位(wei)雜(za)交(jiao)專1用(yong)蓋玻片的(de)保護膜(mo)揭開(kai)后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜(za)交(jiao)過(guo)夜(根據(ju)雜(za)交(jiao)情況可(ke)以調節(jie))。

雜交后洗(xi)滌：揭掉蓋玻片，37℃左右(you)水溫的2×SSC洗(xi)滌5分鐘(zhong)×2次；37℃0.5×SSC洗(xi)滌15分鐘(zhong)×1次; 37℃0.2×SSC洗(xi)滌15分鐘(zhong)×1次(如果有非(fei)特異性染色(se)，重(zhong)復0.2×SSC洗(xi)滌15分鐘(zhong)×1-2次)。