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先生: |
將少數菌落轉(zhuan)移到纖維素濾膜上
(1) 在含有選擇性的(de)瓊脂平(ping)板上放一張纖維素濾膜。
(2) 用無菌(jun)牙簽將各個菌(jun)落先轉(zhuan)移至濾(lv)膜上(shang),再轉(zhuan)移至含有選擇性但未放濾(lv)膜的(de)瓊(qiong)脂主平板(ban)上(shang)。應按一(yi)定的(de)格子進(jin)行劃線接種(或打點)。每(mei)菌(jun)落應分別(bie)劃線于兩(liang)個平板(ban)的(de)相同(tong)位置上(shang)。后(hou),在濾(lv)膜和主平板(ban)上(shang)同(tong)時劃一(yi)個含有非(fei)重組質(zhi)粒的(de)菌(jun)落。
(3) 倒(dao)置平板,于37℃培養至劃線的細菌菌落生(sheng)長到0.5-1.0mm的寬度(du)。
(4) 用已裝防水黑色繪圖墨(mo)水的(de)針(zhen)頭(tou)穿(chuan)透濾膜直至瓊脂,在(zai)3個以上(shang)的(de)不對稱位(wei)置(zhi)作標記。在(zai)主平板大致相同的(de)位(wei)置(zhi)上(shang)也作上(shang)標記。
(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒(dao)置貯(zhu)放(fang)于4℃,直至獲得雜交反應(ying)的結(jie)果(guo)。
(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。
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