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將少數菌落轉(zhuan)移到纖維素濾膜上

(1) 在含有選擇性的(de)瓊脂平(ping)板上放一張纖維素濾膜。

(2) 用無菌(jun)牙簽將各個菌(jun)落先轉(zhuan)移至濾(lv)膜上(shang),再轉(zhuan)移至含有選擇性但未放濾(lv)膜的(de)瓊(qiong)脂主平板(ban)上(shang)。應按一(yi)定的(de)格子進(jin)行劃線接種(或打點)。每(mei)菌(jun)落應分別(bie)劃線于兩(liang)個平板(ban)的(de)相同(tong)位置上(shang)。后(hou),在濾(lv)膜和主平板(ban)上(shang)同(tong)時劃一(yi)個含有非(fei)重組質(zhi)粒的(de)菌(jun)落。

(3) 倒(dao)置平板,于37℃培養至劃線的細菌菌落生(sheng)長到0.5-1.0mm的寬度(du)。

(4) 用已裝防水黑色繪圖墨(mo)水的(de)針(zhen)頭(tou)穿(chuan)透濾膜直至瓊脂,在(zai)3個以上(shang)的(de)不對稱位(wei)置(zhi)作標記。在(zai)主平板大致相同的(de)位(wei)置(zhi)上(shang)也作上(shang)標記。

(5) 用Parafilm膜封好主平板,倒(dao)置貯(zhu)放(fang)于4℃,直至獲得雜交反應(ying)的結(jie)果(guo)。

(6) 裂解細菌,按本段下面所述方法,使釋放的DNA結合于纖維素濾膜。

FISH是原位雜交技術大家族中的一員,因其所用探針被熒光物質標記(間接或直接)而得名,該方法在80年代末 被發明,現已從實驗室逐步進入臨床診斷領域。基本原理是熒光標記的核酸探針在變性后與已變性的靶核酸在退火 溫度下復性;通過熒光顯微鏡觀察熒光信號可在不改變被分析對象(即維持其原位)的前提下對靶核酸進行分析。DNA熒光標記探針是其中常用的一類核酸探針。利用此探針可對組織、細胞或染色體中的DNA進行染色體及基因水平 的分析。熒光標記探針不對環境構成污染,靈敏度能得到保障,植物原位雜交技術服務,可進行多色觀察分析,因而可同時使用多個探針,縮 短因單個探針分開使用導致的周期過程和技術障礙。

分子病理學在蛋白質和核酸等生物大分子水平上,應用分子生物學理論、技術及方法研究疾病發生L發展的過程,從而為傳統的病理學注入了生機。在如今的臨床病理診斷過程中,運用核酸原位雜交、PCR技術、免1疫熒光、免1疫組織化學染色等技術,能夠更加深化對疾病的本質認識,對于腫1瘤的診斷和治1療也有著臨床的指導意義。分子病理學診斷主要應用于以下幾個方面:1、對于腫1瘤易感基因的檢測,對于腫1瘤高危人群的篩檢具有實用價值,如檢測GSTπ基因以判定個體暴露于致癌物是的致癌危險性。2、腫1瘤相關病毒的檢測,如采用原位雜交方法檢測標本中HPV、EBER等病毒。

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